چگونگي تهيه محيط كشت

• حل كردن محيط كشت

اولين قدم در تهيه محيط كشت انتخاب ارلن مناسب اين كار ميباشد . بدين معني كه ارلن مورد استفاده بهتر است 1 يا 2 ليتر حجم داشته باشد به عبارتي حجم آن بقدري باشد كه بتوان با استفاده  از نصف ظرفيت ارلن  ميزان محيط مورد نياز را آماده نمود تا امكان تكان دادن محلول محيط كشت به سهولت فراهم باشد . ظرف مورد استفاده بايد به دقت شسته و تميز شده باشد و بهتر آنست كه پس از شستشوي معمولي آنرا با آب مقطر يا ديونيزه  آبكشي نمود تا احتمال باقي ماندن املاح و عناصر مضر رشد ميكروارگانيسم به حداقل برسد . براي تهيه محيط كشت پس از توزين دقيق محيط پودري ( مطابق دستور مندرج در برچسب محيط ) آنرا در بالن آماده شده ميريزيم و سپس نصف ميزان آب مقطر يا ديونيزه لازم را به آن اضافه ميكنيم و بالن را بخوبي تكان ميدهيم تا محلول همگني بدست آيد آنگاه بقيه آب مقطر يا ديونيزه مانده را اضافه مي نمائيم . محيط هاي فاقد آگار يا ژلاتين معمولا براحتي در آب سرد حل ميگردند ( و يا به ميزان اندكي حرارت نياز دارند ) ولي براي تهيه محلول محيط هاي آگاردار  يا ژلاتين دار بايد از حرارت استفاده نمود . حل شدن اين گروه از محيط ها بايد در حمام آب جوش و يا جريان آزاد بخار انجام شود . محيط هائي را كه به اتوكلاو نياز ندارند بايد پس از حرارت دادن بخوبي كنترل نمود تا اثري از ذرات معلق و يا آگار حل نشده در آن باقي نماند . لازم به ذكر است كه تمام محيط هاي كشت به حرارت زياد حساس هستند و لذا بايد از حرارت دادن بيش از اندازه آنها اجتناب نمود .

• كنترل و تنظيم pH

pH  محيط هاي  كشت MIRMEDIA    در حــــــــرارت   C °  25 كنترل و تنظيم شده است . pH  هر محيط كشت به مواد تشكيل دهنده آن ؛ حرارتي كه در آن pH  كنترل ميگردد و روشهاي استريل نمودن محيط بستگي دارد . بايد   pH  هر دو گروه جامد ( آگار دار ) و يا آبگوشتي ( براث ) را در حرارت C °  25     و پس از انجام عمل اتوكلاو كنترل نمود . براي عمل تيتراسيون ميتوان از سود و اسيد كلريدريك نرمال و يكدهم نرمال استفاده نمود .

• استريل نمودن محيط كشت

معمولا محيط هاي كشت را در حرارت C °    121 و فشار 15 پوند به مدت 15 دقيقه اتوكلاو ميكنند ولي اين دستورالعمل براي تمام محيطها صادق نميباشد و براي استريل نمودن هر محيط كشت بايد مطابق دستور مندرج روي برچسب آن عمل كرد . پس از استريل نمودن محيط بهتر است آنرا زود خنك نمود و استفاده از آب سرد متداول ترين روش است .

• توزيع محيط در ظروف

مناسب ترين زمان پخش محيط در ظروف هنگامي است كه دماي محلول محيط كشت به C °    44 تا 54 رسيده باشد.  ميتوان حباب هاي احتمالي حاصل در ظرف پتري ديش محيط هاي آگار دار را با شعله مستقيم آتش از بين برد .